轉移生長因子-β1(TGF-β1)/Smad3信號轉導通路與人類的多種生理病理發生機制相關,但是該信號通路中Smad3被磷酸化的時空信息仍然不完全清楚。為了動態觀察活細胞生理狀態下Smad3被磷酸化的過程,首先進行ECFP-Smad3-Citrine(Smad3 biosensor)融合蛋白表達載體的構建及鑒定;然后轉染293T細胞并觀察轉染效率和融合蛋白表達情況。在熒光顯微鏡下,應用MetaFlour FRET 4.6軟件測量TGF-β1刺激293T細胞前后Smad3 biosensor的熒光能量共振轉移(FRET)的變化情況。結果顯示,Smad3 biosensor轉染效率達40%,融合蛋白表達成功。TGF-β1刺激293T細胞10 min后,監測到胞質內FRET值逐漸減小,青色熒光蛋白(CFP)減弱,黃色熒光蛋白變體(Citrine)增強,歷時約300 s后逐漸恢復。應用FRET技術能使我們在活細胞生理狀態下,實時動態監測TGF-β1/Smad3信號轉導通路的過程。