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    找到 作者 包含"李豫皖" 4條結果
    • 體外誘導人羊膜間充質干細胞向韌帶細胞分化的實驗研究

      目的探討人羊膜間充質干細胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)是否具有MSCs的特性及經誘導后在體外能否向韌帶細胞分化。 方法取產婦胎盤通過酶消化法獲得hAMSCs,流式細胞術鑒定hAMSCs表型特征。取第3代hAMSCs分別加入含不同誘導液的L-DMEM/F12培養基:A組TGF-β1+bFGF,B組透明質酸(hyaluronic acid,HA),C組TGF-β1+bFGF+HA,D組為空白對照組。倒置相差顯微鏡觀察誘導后21 d各組細胞形態學變化;磺酰羅丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法檢測各組細胞生長活性;誘導后7、14、21 d分別采用免疫組織化學染色及實時熒光定量PCR檢測韌帶特異性蛋白和基因Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、肌腱蛋白C(tenascin C,TNC)表達。 結果流式細胞術鑒定結果表明hAMSCs表達MSCs表型。倒置相差顯微鏡觀察示誘導21 d A、B、C組細胞均呈長梭形纖維細胞樣生長,C組細胞形態更單一、有明顯方向性且較A組排列更緊湊。SRB比色法檢測示各組細胞于培養6 d左右達增殖高峰,6 d時A、B、C組細胞活性均顯著高于D組。免疫組織化學結果示:誘導培養7 d,各組均未檢測到TNC表達;7、14、21 d A、B、C組Ⅰ型膠原表達均顯著高于D組,14、21 d A、B、C組Ⅲ型膠原表達顯著高于D組,差異均有統計學意義(P<0.001)。B組Ⅰ型膠原表達以及A、C組Ⅲ型膠原、TNC表達隨時間增加均呈逐漸增高趨勢,各時間點間比較差異均有統計學意義(P<0.001)。實時熒光定量PCR結果示:誘導培養21 d,C組Ⅰ型膠原、TNC mRNA相對表達量顯著高于A、B組,B組Ⅲ型膠原mRNA相對表達量顯著高于A、C組,差異均有統計學意義(P<0.05)。A、C組Ⅰ型膠原、TNC以及C組Ⅲ型膠原mRNA相對表達量隨時間增加呈逐漸上調趨勢,各時間點間比較差異均有統計學意義(P<0.001)。 結論hAMSCs具有MSCs的特性,有良好增殖能力,經體外誘導后韌帶特異性基因表達上調,韌帶特異性蛋白合成增加,可作為韌帶組織工程種子細胞來源之一。

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    • 組織工程技術促進股骨頭壞死骨組織再血管化的研究進展

      目的總結采用組織工程技術促進股骨頭壞死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)骨組織再血管化的研究進展。方法廣泛查閱近年國內外相關文獻,闡明股骨頭血管化機制,對組織工程技術在促進 ONFH 骨組織再血管化中的應用進展進行總結歸納。結果重建或改善股骨頭血供是治療 ONFH 的關鍵,目前組織工程研究熱點主要基于種子細胞、支架材料以及促血管生成因子三方面,聯合 3D 打印技術和藥物遞送系統來促進股骨頭骨組織再血管化。結論基于組織工程技術的股骨頭再血管化策略,有望改善局部血供,延緩甚至逆轉 ONFH 進展。

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    • 人工踝關節彈性化改良襯墊的有限元分析

      目的 通過有限元分析探討人工踝關節彈性化改良襯墊(以下簡稱“改良襯墊”)在減少假體微動和改善關節面接觸力學方面的影響。方法 基于INBONE Ⅱ植入物系統原始襯墊(模型A),通過添加弧形或平臺型及層厚分別為1.3、2.6 mm的柔性層,構建4種改良襯墊,分別為雁飛型_1.3彈性化改良襯墊(模型B)、雁飛型_2.6彈性化改良襯墊(模型C)、平臺型_1.3彈性化改良襯墊(模型D)、平臺型_2.6彈性化改良襯墊(模型E)。然后,采集1名健康成年男性志愿者右踝關節中立位CT掃描數據,通過Mimics 19.0軟件、Geomagic wrap 2017軟件、Creo 6.0軟件、Hypermesh 14.0軟件、Abaqus 6.14軟件,構建基于模型A~E假體的人工全踝關節置換術(total ankle replacement,TAR)有限元模型。最后,在ISO步態載荷下檢驗不同模型之間的骨-金屬假體界面微動和關節面接觸行為的差異。結果 各組模型脛骨/距骨-金屬假體界面微動均在支撐相時逐漸增大,進入擺動相后減小;完整步態周期中,模型B~E骨-金屬假體界面微動與模型A相比均下降,但組間差異無統計學意義(P>0.05);最大微動脛骨出現在骨槽穹頂處且微動區域面積模型A最大、模型E最小,而距骨出現在中央骨槽后表面且微動區域面積組間無明顯差異。各組模型襯墊/距骨假體關節面接觸面積均呈在支撐相上升、在擺動相下降的總體趨勢。其中,模型B~E與模型A相比關節面接觸面積更大,但組間差異無統計學意義(P>0.05)。各組襯墊/距骨假體關節面最大接觸應力變化趨勢與接觸面積相似;其中,模型D、E襯墊關節面最大接觸應力小于模型A,模型B~E距骨假體關節面最大接觸應力均小于模型A,組間差異無統計學意義(P>0.05)。改良型襯墊外側關節面高應力區面積明顯縮小,距骨假體表面應力分布更均勻。結論 在襯墊中增加柔性層可以提高整體部件彈性,有利于吸收人工踝關節沖擊力,從而降低界面微動和改善接觸行為,其中平臺構型和柔性層較厚的改良襯墊機械性能更好。

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    • TGF-β1 聯合 VEGF 對人羊膜間充質干細胞向韌帶成纖維細胞體外分化作用的研究

      目的 探討人羊膜間充質干細胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)是否具有 MSCs 特性,以及經 TGF-β1 和 VEGF 聯合誘導后是否具有向韌帶成纖維細胞分化的能力。 方法 取自愿捐贈的足月產婦胎盤,采用胰蛋白酶膠原酶聯合消化法分離培養 hAMSCs,流式細胞術檢測 hAMSCs 表型分子,免疫熒光染色檢測 hAMSCs 其角蛋白-19(cytokeratin-19,CK-19)和波形蛋白表達情況。取第 3 代 hAMSCs,分別使用含 TGF-β1 和 VEGF 的 L-DMEM/F12 成韌帶或纖維細胞誘導培養基(實驗組)和普通 L-DMEM/F12 培養基(對照組)培養,細胞增殖-毒性檢測試劑盒(cell counting kit-8,CCK-8)檢測兩組細胞增殖能力;培養 5、10、15 d 分別采用免疫熒光染色及實時熒光定量 PCR 檢測韌帶及血管生成相關特異性蛋白和基因表達。 結果 倒置相差顯微鏡觀察示 hAMSCs 呈單層貼壁生長;流式細胞術結果示 hAMSCs 表達 MSCs 表型分子;免疫熒光染色示 hAMSCs 高表達波形蛋白、低表達 CK-19;hAMSCs 具有向成骨、成軟骨及成脂細胞分化的能力。CCK-8 法檢測示,7 d 時兩組細胞均達增殖高峰,實驗組細胞增殖能力于 7 d 后顯著高于對照組(P<0.05)。免疫熒光染色示,培養 5、10、15 d 時實驗組 Ⅰ 型膠原、Ⅲ 型膠原、纖維連接蛋白(Fibronectin)、細胞連接素(Tenascin-C)表達染色均較對照組增強。實時熒光定量 PCR 結果示,隨時間延長實驗組 Ⅰ 型膠原、Ⅲ 型膠原、Fibronectin、α-肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、VEGF mRNA 相對表達量均逐漸上調(P<0.05)。除培養 5 d 兩組 Ⅰ 型膠原、Ⅲ 型膠原、VEGF mRNA 相對表達量比較差異無統計學意義(P>0.05)外,其余各時間點實驗組 Ⅰ 型膠原、Ⅲ 型膠原、Fibronectin、α-SMA 和 VEGF mRNA 相對表達量均顯著高于對照組(P<0.05)。 結論 hAMSCs 具有 MSCs 特征,且體外增殖能力良好,可作為組織工程種子細胞來源;體外誘導后韌帶成纖維細胞及血管生成相關特異性基因表達上調,韌帶成纖維細胞特異性蛋白分泌增加,TGF-β1 聯合 VEGF 可作為構建組織工程韌帶的生長因子選擇。

      發表時間:2017-05-05 03:16 導出 下載 收藏 掃碼
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