比較兩種不同低溫保護劑對皮膚組織橋粒芯糖蛋白1（desmoglein 1，Dsg1）低溫保存后表達的影響，為尋求皮膚組織低溫保護劑的優良配方提供實驗依據。 方法 取燒傷患者整形術后自愿捐獻所余大腿部刃厚皮片5 塊，于取皮后4 h 內進行實驗。根據冷凍時添加保存劑不同，將皮片分為3 組。A 組（n=2）：0.5 mol/L 的海藻糖 /DMSO；B 組（n=2）：傳統低溫保護劑DMSO/ 丙二醇；置于 — 196℃液氮中分別儲存7、21 d 后復溫取材進行實驗；C 組（n=1）：新鮮刃厚皮片，不作任何保護劑處理。對各組皮片行免疫組織化學染色觀察，RT-PCR 方法檢測皮片Dsg1 基因水平。 結果 免疫組織化學染色見儲存7 d 后，A、B 組Dsg 1 蛋白染色均呈棕黃色，分布較均勻，表皮基底細胞表達信號與C 組相似；A、B 組吸光度（A）值分別為0.285 ± 0.006、0.284 ± 0.004；與C 組0.287 ± 0.008 比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。儲存21 d 后，A 組陽性細胞表達無明顯減弱，B 組強度減弱；A、B 組A 值分別為0.282 ± 0.004、0.275 ± 0.005，B組與A、C 組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。RT-PCR 檢測示C 組、儲存7 d A、B 組及儲存21 d A、B 組Dsg 1 基因表達A 值分別為0.814 ± 0.012、0.810 ± 0.012、0.803 ± 0.008、0.806 ± 0.008 及0.782 ± 0.013。儲存后21 d B 組和A、C 組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05），余時間點組間比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論 海藻糖與DMSO 聯合應用對皮膚組織Dsg1 的保護作用優于DMSO/ 丙二醇。
比較海藻糖與傳統低溫保護劑對皮膚組織α- 輔肌動蛋白（α-actinin）低溫保存后表達的影響，進一步揭示海藻糖的低溫抗凍機制。 方法 實驗共進行6 次，每次取自愿捐獻燒傷患者整形術后所余大腿部刃厚皮片5 塊，根據凍存時添加保存液不同，將皮片隨機分為5 組，每組各1 塊。T/D 組：添加0.5 mol/L 海藻糖/DMSO，完全浸沒皮片；D/P 組：DMSO/ 丙二醇；D/K 組：DMSO/ 無血清角質細胞培養基；DMEM 組：DMEM；置于－ 196℃液氮中儲存14 d 后復溫進行實驗；對照組：刃厚皮片不作任何處理。對各組皮片進行免疫組織化學染色觀察，RT-PCR 方法檢測皮片α-actinin 基因水平，皮膚內琥珀酸脫氫酶（succinate dehydrogenase，SDH）定量測定法檢測皮膚活力。 結果 對照組、T/ D 組、D/P 組、D/K 組及DMEM 組吸光度（A）值分別為27.50 ± 7.92、18.40 ± 5.81、13.10 ± 5.11、11.50 ± 4.54 及5.30 ±2.14。對照組與T/D 組比較差異無統計學意義（P gt; 0.05），與其他組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。RT-PCR 檢測對照組、T/D 組、D/P 組、D/K 組及DMEM 組α-actinin 基因表達A 值分別為0.816 ± 0.134、0.723 ± 0.245、0.564 ± 0.265、0.245 ± 0.071 及0.148 ± 0.048。對照組與T/D、D/P 組比較，差異無統計學意義（P gt; 0.05）；與D/K、DMEM 組比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。對照組、T/D 組、D/P 組、D/K 組及DMEM 組SDH 活性值分別為18.2 ± 3.7、12.3 ± 3.6、10.2 ± 2.4、7.3 ± 2.1 及5.7 ± 1.5。對照組與T/D 組比較差異無統計學意義（P gt; 0.05），與其他組比較，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結 論 海藻糖對低溫保存皮膚組織α-actinin 的保護作用在其抗凍機制中發揮了重要作用。
冷凍干燥是一種使生物樣本在干燥狀態下保存的技術，有利于儲存、運輸并節省成本。本文使用聚乙二醇（PEG）和海藻糖（Tre）組成的凍干保護劑處理牛心包，進行冷凍干燥。結果表明：使用PEG + 10% w/v Tre處理牛心包進行冷凍干燥后，其力學性能優于使用戊二醛（GA）固定的牛心包。卡爾費休法測定，牛心包復水后的濕態含水量為（74.81 ± 1.44）%，與GA固定的牛心包無明顯差異。干態含水量為（8.64 ± 1.52）%，說明在冷凍干燥過程中能有效脫水。差示掃描量熱儀（DSC）的測試結果顯示，牛心包的熱皺縮溫度為（84.96 ± 0.49）℃比GA固定的牛心包（83.14 ± 0.11）℃高，說明具有更高的熱穩定性。傅里葉變換紅外光譜（FTIR）結果顯示，在冷凍干燥過程中，蛋白質結構并未受到破壞。蘇木精-伊紅（HE）染色表明，冷凍干燥過程可以減少孔隙的產生，防止冰晶的生長，使組織纖維結構排列更緊密。細胞存活率與溶血率檢測結果顯示，細胞增殖率為（77.87 ± 0.49）%，毒性分級為1級，溶血率為（0.17 ± 0.02）%，低于5%的標準，即經過冷凍干燥處理的牛心包在細胞毒性和溶血方面表現良好，符合相關標準。綜上，使用PEG + 10% w/v Tre處理牛心包進行冷凍干燥后的性能符合要求。